細胞培養(yǎng)常規(guī)方法
細胞培養(yǎng)常規(guī)方法
1. 凍存細胞的復蘇
-
應(yīng)遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37-37。5度，取出凍存的細胞迅速放入后將細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化。
-
在無菌臺內(nèi)將完全培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶內(nèi)，約5ml左右，然后用無菌吸管從凍存管內(nèi)取出細胞，置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃，使細胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
2. 傳代:
-
貼壁細胞:
-
懸浮細胞:
對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml完全培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入完全培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入完全培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
3. 凍存
將貼壁細胞消化后離心收集，懸浮細胞直接離心收集，以完全培養(yǎng)基或胎牛血清重懸細胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過夜。次日保存到液氮中。
